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2023-09-06 15:00
一、什么是PNH
阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种后天获得性的造血干细胞基因突变所致的红细胞膜缺陷性疾病，国内患者十年生存率约为70%。临床表现以血管内溶血性贫血为主，可伴有血栓、肾功能不全、肺动脉高压等症状。典型病人有特征性间歇发作的睡眠性血红蛋白尿。国内男性患者多于女性，发病高峰年龄为20-40岁。患者长期承受病痛折磨，生活质量低下。很多患者处于生命的黄金时期，作为家庭支柱却因病丧失劳动力，造成极大的社会负担。
二、PNH的发病机制
PNH的发病机制为位于X染色体(Xp22.1)的糖化磷脂酰肌醇-A(PIG-A)基因在造血干细胞水平发生体细胞突变，导致部分或完全的GPI锚合成和表达障碍，造成正常情况下通过与GPI锚结合的锚连蛋白无法与之结合，而表现为细胞表面锚连蛋白的缺失。
三、PNH的常见症状及并发症
PNH的主要临床表现为发作性血管内溶血、阵发性血红蛋白尿、骨髓造血功能衰竭和静脉血栓形成，同时会造成严重的并发症。
四、PNH各亚型的特点
国际PNH工作组于2005年将PNH分为三种类型。①经典PNH：存在PNH克隆，同时有溶血和(或)血栓的临床表现并除外其他骨髓衰竭性疾病(BMF)；②BMF伴PNH克隆：如再生障碍性贫血(AA)或骨髓增生异常综合征(MDS)等；③亚临床型 PNH：有少量或微量PNH克隆，但没有溶血或血栓形成的临床或实验室证据。
五、PNH的诊断流程
六、流式细胞术辅助PNH诊断
流式细胞术（FCM）可以检测不同血细胞群体GPI锚连蛋白及锚的缺失、精确量化PNH克隆的大小及其特性，同时对PNH小克隆的检出具有较高的灵敏度，成为当前PNH检测的金标准。为了进一步提高我国PNH的诊断水平和规范检测方法及报告，2021年4月中国生物工程学会细胞分析专业委员会、中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组和中华医学会血液学分会红细胞学组结合临床经验、研究成果和国际最新指南，联合发布《阵发性睡眠性血红蛋白尿症流式细胞术检测中国专家共识（2021）》供临床参考。
七、FCM检测细胞PNH克隆
红细胞上用于PNH检测的锚连蛋白主要是CD59和CD55，由于CD59表达量高，与其他抗原相比，更容易鉴别正常细胞（I型细胞）、部分缺失（Ⅱ型细胞）和完全缺失（Ⅲ型细胞）的PNH细胞。而CD55在红细胞的表达较低，已不建议使用CD55进行临床检测。高敏感检测同时需要增加CD235a作为设门抗体，以减低非特异干扰。荧光素的选择上，推荐使用CD235a-FITC，CD59-PE。
检测白细胞GPI相关锚蛋白最好的试剂为嗜水气单胞菌溶素变异体（FLAER），应选择适当的锚连蛋白抗体同时与FLAER及设门抗体联合应用。粒细胞和单核细胞上的GPI锚连蛋白主要选用CD24和CD14。CD157同时表达于单核细胞和中性粒细胞，可代替CD14和CD24。PNH时，FLAER因不能与细胞膜的GPI锚结构中的多糖结合，从而表现为阴性。对粒细胞检测推荐采用FLAER和CD24或CD157，单核细胞则采用FLAER和CD14或CD157。当FLAER和上述锚连蛋白双阴性时确定为PNH克隆。设门抗体的选择上，CD15是粒细胞通用的抗体，对于单核细胞的设门标志的选择，国际上推荐CD64，但国内研究发现，当采用CD45、CD33和CD15同时进行粒细胞及单核细胞设门仍然有很好的可行性。
八、中生流式实测图
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引用本文：
阵发性睡眠性血红蛋白尿症流式细胞术检测中国专家共识（2021年版）[J].中华血液学杂志,2021,42(4):281-287.
医脉通：PNH名医讲堂.
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